一、實驗動物選擇與術(shù)前準備

1. 品系選擇

• C57BL/6小鼠：基因同源性高，耐受性強，廣泛用于基因編輯研究（如CRISPR-Cas9）。

• 轉(zhuǎn)基因小鼠（如CX3CR1-GFP）：用于追蹤小膠質(zhì)細胞動態(tài)變化，研究免疫調(diào)控機制。

• 年齡與性別：

• 年齡：8-12周齡（性成熟期，骨生長板閉合）；

• 性別：雄性為主（避免雌激素周期干擾），部分研究需雌性以模擬性別差異效應(yīng)。

2. 術(shù)前準備

• 適應(yīng)性飼養(yǎng)：SPF環(huán)境中適應(yīng)7天，控制光照周期（12h/12h）與標準飼料。

• 麻醉方案：

  麻醉劑	濃度與劑量	適用場景
  異氟烷	4%誘導(dǎo)，1-2%維持（混合30% O?/70% N?）	常規(guī)手術(shù)，術(shù)后恢復(fù)快
  三溴乙醇	1.25%腹腔注射（20μL/g）	短時操作，需注意肝毒性

二、造模方法分類與操作流程

1. 挫傷型模型（主流方法）

改良Allen's法：

1. 椎板暴露：T9-T11節(jié)段背部正中切口，分離椎旁肌肉，咬除T10椎板暴露脊髓。

2. 打擊參數(shù)：

• 氣壓打擊：使用PSI-IH打擊器，設(shè)定壓力0.7N，打擊深度1.0mm，停留時間0.1s。

• 重物墜擊：10g砝碼從8.3cm高度墜落，通過套管間接撞擊脊髓。

3. 判定標準：

• 即刻反應(yīng)：雙后肢抽動、尾巴甩動；

• 術(shù)后蘇醒：后肢遲緩性癱瘓，BMS評分≤2分（滿分9分）。

智能自動化系統(tǒng)（G smart SCI system）：

• 優(yōu)勢：激光測距+自動化平臺，減少人為誤差，實現(xiàn)打擊參數(shù)（速度、深度）精準控制。

• 應(yīng)用：可生成輕、中、重度損傷模型，用于梯度修復(fù)研究。

2. 壓迫型模型

• 鉗夾法：

• 使用動脈瘤夾（壓力50g，持續(xù)30s）夾閉T10脊髓，模擬臨床椎管狹窄或腫瘤壓迫。

• 病理特征：軸突斷裂、星形膠質(zhì)細胞增生，MBP表達下降>60%。

• 氣囊壓迫：植入微型氣囊，逐步充氣至壓力20mmHg，持續(xù)5分鐘。

3. 橫斷型模型

• wan全橫斷：顯微剪刀切斷T10節(jié)段脊髓，用于研究神經(jīng)再生屏障。

• 部分橫斷：單側(cè)半切（保留50%脊髓完整性），評估不對稱運動功能恢復(fù)。

4. 化學(xué)損傷模型

• 谷氨酸注射：T10硬膜外注射1μL谷氨酸（10mM），誘導(dǎo)興奮性毒性損傷。

• 脂多糖（LPS）模型：局部注射LPS（1μg/μL）模擬神經(jīng)炎癥，IL-6升高>5倍。

三、術(shù)后管理與并發(fā)癥防控

1. 基礎(chǔ)護理

• 鎮(zhèn)痛：布洛芬緩釋片（10mg/kg，bid×3天）或局部冷敷。

• 抗感染：頭孢呋辛鈉（90mg/kg，qd×7天）。

• 膀胱管理：每日人工按摩排尿2-4次，直至自主排尿恢復(fù)（約7-14天）。

2. 生存質(zhì)量監(jiān)測

• 體重閾值：術(shù)后體重下降>15%或活動量減少>50%需終止實驗。

• 營養(yǎng)支持：高熱量軟食（如凝膠飼料）預(yù)防營養(yǎng)不良。

四、模型驗證與評估體系

1. 行為學(xué)評估

2. 影像學(xué)分析

• 微型MRI：T2加權(quán)像顯示損傷中心高信號，T2 mapping值升高>30%。

• Micro-CT：量化骨贅形成（BV/TV>5%提示繼發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎）。

3. 組織病理學(xué)

4. 分子生物學(xué)檢測

• 炎癥因子譜：ELISA檢測TNF-α (>80pg/mL)、IL-6 (>120pg/mL)。

• 氧化應(yīng)激：比色法測定MDA (>4nmol/mg蛋白)、SOD活性下降>30%。

五、創(chuàng)新方向與技術(shù)突破

1. 基因編輯與細胞治療：

• CRISPR-Cas9：敲除Nogo-A基因促進軸突再生，運動功能恢復(fù)率提升40%。

• 小膠質(zhì)細胞移植：Mr BMT-X Ray方案替換效率達84.8%，優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

2. 智能監(jiān)測系統(tǒng)：

• 植入式柔性傳感器：實時監(jiān)測損傷區(qū)pH、IL-6濃度（精度±5pg/mL）。

• AI預(yù)后模型：基于Micro-CT圖像的3D ResNet算法預(yù)測修復(fù)潛力（AUC=0.93）。

3. 類器官與生物材料：

• 脊髓類器官芯片：iPSC分化的神經(jīng)元與膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)，模擬損傷微環(huán)境。

• 4D打印支架：溫敏性GelMA水凝膠負載BDNF，孔隙率85%促進血管化。

六、倫理與標準化挑戰(zhàn)

1. 動物福利：

• 推行“3R原則"（替代、減少、優(yōu)化），推廣離體脊髓切片模型減少活體使用。

• 國際共識指標：制定《ARRIVE-SCI指南》，統(tǒng)一手術(shù)參數(shù)與評估標準。

2. 數(shù)據(jù)可比性：

• 第三方驗證：關(guān)鍵指標（如BMS評分、GFAP表達）需跨實驗室重復(fù)（CV<10%）。