一、模型構(gòu)建流程及技術(shù)要點(diǎn)

1. 實驗動物選擇

• 品系：優(yōu)先選用 BALB/c nu/nu 裸鼠（免疫缺陷，避免宿主免疫排斥），雄性為主（性別差異影響較小）。

• 年齡與體重：推薦4-6周齡，體重18-20 g（淋巴系統(tǒng)發(fā)育成熟，代謝穩(wěn)定）。

• 飼養(yǎng)條件：SPF級環(huán)境，單獨(dú)籠養(yǎng)（防止感染和zi殘）。

2. 腫瘤細(xì)胞準(zhǔn)備

• 細(xì)胞株選擇：需根據(jù)研究目的選擇高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系，例如：

• 結(jié)直腸癌：HCT-116（低分化腺癌，成瘤率100%，6周一級淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率100%）。

• 卵巢癌：SKOV3（定向淋巴道轉(zhuǎn)移，傳代后轉(zhuǎn)移率穩(wěn)定）。

• 舌鱗癌：Tca8113（轉(zhuǎn)移率67.5%）。

• 細(xì)胞懸液制備：

• 濃度：1×10? cells/mL（HCT-116）或4×10? cells/0.04 mL（SKOV3）。

• 活力要求：臺盼藍(lán)染色活細(xì)胞率>95%。

3. 注射操作

• 注射部位：裸鼠右后肢爪墊皮下（淋巴引流方向明確，一級至三級淋巴結(jié)依次為腘窩→腹股溝→髂血管旁→腎門）。

• 麻醉：1%lv胺酮腹腔注射（0.3 mL/只），5分鐘內(nèi)起效。

• 技術(shù)細(xì)節(jié)：

• 使用2號針頭緩慢注射，局部形成隆丘后退針（避免滲漏或淋巴管堵塞）。

• 注射后15分鐘裸鼠蘇醒，活動正常。

4. 術(shù)后管理

• 感染防控：必要時給予抗生素（如頭孢類）預(yù)防傷口感染。

• 監(jiān)測周期：每周測量腫瘤體積（公式：V=1/2×長徑×短徑2），觀察淋巴結(jié)腫大（觸診或活體成像）。

二、模型評價體系

1. 成瘤與轉(zhuǎn)移指標(biāo)

• 成瘤率：1周內(nèi)成瘤率可達(dá)100%（HCT-116）。

• 轉(zhuǎn)移時間窗：

• 一級淋巴結(jié)（腘窩/腹股溝） ：3周開始轉(zhuǎn)移，6周轉(zhuǎn)移率100%。

• 二級淋巴結(jié)（髂血管旁） ：5周轉(zhuǎn)移率20%，8周達(dá)60%。

• 三級淋巴結(jié)（腎門） ：8周后出現(xiàn)轉(zhuǎn)移（20%）。

• 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：通常無肺/肝轉(zhuǎn)移（模型特異性）。

2. 組織病理學(xué)驗證

• HE染色：淋巴結(jié)髓竇區(qū)可見異型癌細(xì)胞浸潤（核大深染，核分裂象多見）。

• 免疫組化：

• CEA（結(jié)直腸癌標(biāo)志物）：陽性表達(dá)證實轉(zhuǎn)移灶來源。

• EMA/CK18（上皮標(biāo)志物）：用于舌鱗癌轉(zhuǎn)移鑒定。

3. 功能學(xué)評價

• 疼痛行為學(xué)：Von Frey測痛儀檢測機(jī)械痛閾值變化（炎癥反應(yīng)指標(biāo)）。

• 影像技術(shù)：

• Micro-CT：結(jié)合免疫磁珠增強(qiáng)信號，監(jiān)測早期微小轉(zhuǎn)移。

• 活體熒光成像：適用于標(biāo)記熒光蛋白的腫瘤細(xì)胞。

三、模型優(yōu)化策略

1. 提高轉(zhuǎn)移效率

• 連續(xù)傳代篩選：取轉(zhuǎn)移灶細(xì)胞重復(fù)傳代（如SKOV3傳3代后轉(zhuǎn)移率穩(wěn)定）。

• 基因編輯：過表達(dá)促轉(zhuǎn)移因子（如VEGF-D增強(qiáng)淋巴管生成）。

• 輔助處理：切除帶瘤下肢（腘窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率從60%提升至80%）。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化改進(jìn)

• 細(xì)胞接種量：優(yōu)化至4×10? cells/只（平衡成瘤速度與動物耐受性）。

• 時間節(jié)點(diǎn)：6周為典型觀察終點(diǎn)（一級轉(zhuǎn)移充分，二級開始擴(kuò)散）。

四、應(yīng)用場景與挑戰(zhàn)

1. 研究領(lǐng)域

• 轉(zhuǎn)移機(jī)制：揭示淋巴管新生（如VEGFR-3通路）、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等關(guān)鍵過程。

• 藥物篩選：評價抗轉(zhuǎn)移藥物（如卡培他濱抑制HCT-116轉(zhuǎn)移）。

• 影像技術(shù)驗證：測試新型示蹤劑對微轉(zhuǎn)移灶的檢測靈敏度。

2. 局限性

• 免疫微環(huán)境缺失：裸鼠T細(xì)胞缺陷，無法模擬免疫逃逸過程（需聯(lián)合人源化模型）。

• 種屬差異：小鼠淋巴管結(jié)構(gòu)與人類存在差異（需結(jié)合3D類器官驗證）。

五、典型案例分析

六、總結(jié)與展望

裸鼠爪墊淋巴道轉(zhuǎn)移模型憑借操作簡便、轉(zhuǎn)移路徑明確和高重復(fù)性，成為研究腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的黃金標(biāo)準(zhǔn)。未來趨勢包括：

1. 多組學(xué)整合：結(jié)合單細(xì)胞測序解析轉(zhuǎn)移異質(zhì)性。

2. 動態(tài)監(jiān)測技術(shù)：開發(fā)高分辨率活體成像系統(tǒng)。

3. 人源化改進(jìn)：引入免疫重建或類器官共培養(yǎng)系統(tǒng)。