激光共聚焦制作

    激光共聚焦制作

    共聚焦顯微技術（Confocal microscopy）是通過激光掃描共聚焦顯微鏡來獲取細胞內某個薄層面上的熒光信息, 并結合計算機自動控制和信息收集功能，對熒光信號的分布、強度和動態(tài)變化進行較好的的分析和整合, 從而得到豐富的細胞信息。

1.消除了聚焦平面以外的熒光信號的干擾, 故成像清晰

2.可以對樣品不同層面進行連續(xù)逐層掃描, 再由計算機將這些圖形重組為三維圖像，圖形清晰度高、層次分明、立體感更強

3.可對細胞某個選定結構進行長度和體積的測量, 在分析細胞空間結構和某些物質的胞內定位方面具有明顯的優(yōu)勢

4.可同時實現(xiàn)多重指標的檢測。目前，該技術應用范圍已擴展到細胞學、微生物學、發(fā)育生物學、遺傳學、神經生物學、生理和病理學等學科，成為現(xiàn)代生物學微觀研究的重要工具

   激光共聚焦制作

使用前請注意：

1.實驗設計前請了解儀器相關配置參數(shù)，選擇合適的抗體或熒光染料等。我校共聚焦顯微鏡激光器波長分別為405nm、488nm、532nm、635nm。同時為了避免使用沖突，請?zhí)崆邦A約使用時間。

2.細胞樣品請用0.17mm的蓋玻片爬片或者用共聚焦培養(yǎng)皿培養(yǎng)，組織樣品后用0.17mm蓋玻片封片；封片劑可用緩沖甘油或防淬滅劑等，對于活細胞，則可使其浸潤于相應的溶液中，直接滴片和封片，立即觀察，不加上述封片劑。

3.為了獲得理想的圖像，組織切片或細胞標本不能太厚及太密，并且應避免細胞重疊或雜質掩蓋。

4.為保持組織細胞的完整性和所要檢測物質的抗原性，非活細胞觀察的樣品請盡量用固定劑固定樣品。

5.用前請用熒光顯微鏡確認一下是否有熒光，條件摸索調整合適后再使用共聚焦顯微鏡。

使用時，注意以下幾點：

1.嚴格按照使用規(guī)程操作，不得改變操作程序，激光共聚焦顯微鏡系統(tǒng)中的激光器使用壽命有限且價格昂貴。所以，在操作過程中切記，在開關的啟動順序以及在掃描過程中努力做到快速有序，保護好激光器。

2.注意不要暴露在中等功率和高功率的激光輻射中，特別要注意不得注視激光束，甚至不要觀看樣品；不得在系統(tǒng)附近儲存或使用易燃易爆物的固體、液體或氣體；可以引燃的材料如布或紙張不得放入光路中。

3.掃描后的圖像儲存在計算機內，可作進一步處理。由于計算機的硬盤有限，應及時儲存到用戶CD光盤上，為了防止病毒浸染，禁用U盤及移動硬盤等。

使用后注意：

及時用無水乙醇將油鏡鏡頭擦干凈，物鏡鏡頭調至低點，將顯微鏡周圍及房間清理干凈，后填寫使用記錄。