過敏性哮喘動物模型

過敏性哮喘動物模型實驗服務介紹：

BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射OVA液和DBP溶液，第21~23天連續(xù)3天以OVA溶液霧化激發(fā)，每天于上午下午固定時間霧化2次，每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化，后一次霧化結束后24小時，小鼠摘眼球取血，取支氣管肺泡灌洗液及肺組織。

一般行為學觀察  觀察小鼠在霧化過程中是否出現(xiàn)撓臉、毛發(fā)豎立、呼吸急促、煩躁不安、大小便失禁等現(xiàn)象。

血中Eos計數(shù)    后一次霧化激發(fā)結束24h后，小鼠摘眼球取血，獲得血液后立即取出20 μl與380μl 嗜酸性粒細胞稀釋液混勻，利用細胞計數(shù)板于光學 顯微鏡下進行Eos計數(shù)。

血清中IgE測定   將獲得的血液靜置2h后，離心，3500 rpm，15min，取血清，按IgE ELISA試劑盒說明書進行測定，并通過樣本總蛋白含量進行結果校正。

BALF細胞分類計數(shù)  將小鼠仰臥位固定，打開胸腔后，結扎右肺及左側肺上葉。分離并暴露氣管，用適宜針頭進行插管，以預冷PBS反復灌洗肺組織（0.5 mL/次，共兩次），收集BALF，低溫離心( 3500 rpm，10min )，取上清，保存于-20℃待測。細胞沉淀用0.2 mL預冷PBS重懸，吹打均勻后取10 μl于細胞計數(shù)板上在光學顯微鏡下計細胞總數(shù)，剩余細胞懸液涂片，用快速瑞姬氏染液染色，顯微鏡下進行細胞分類計數(shù)。

BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的測定  將獲得的BALF上清根據(jù)相關細胞因子檢測試劑盒的說明書進行各指標定量檢測，測定結果經(jīng)總蛋白含量校正。

肺組織中IL-4和IFN-γ的測定  將右側肺組織用預冷的PBS研磨得15 % 組織勻漿，低溫離心，3500 rpm，15min，取上清按照 ELISA 測定試劑盒的操作步驟進行IL-4和IFN-γ測定，并通過樣本總蛋白定量來進行校正。

肺組織HE及PAS染色  剪取左肺上葉，置10%中性福爾馬林中固定，石蠟包埋，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE及PAS染色，鏡下觀察肺組織炎性細胞浸潤及黏性蛋白增生情況。

分子實驗平臺：高效運作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術、分子克隆與質粒構建、流式細胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實驗、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實驗。

基因組學平臺：可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實驗。

蛋白組學平臺：能實現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質修飾分析等重點實驗項目。

病理學平臺：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學染色、HE染色、特殊染色等實驗。

臨床前CRO服務：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學評價服務，包括靶點驗證、體內外模型的構建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評價、藥代

動力學和藥理學研究以及院內制劑研發(fā)等。

項目轉化服務：助力客戶進行方案設計、聯(lián)合課題申報、藥物項目引進和孵化，解決客戶對實驗技術平臺、專業(yè)人和融資的需求。