小鼠腦血管痙攣模型

小鼠腦血管痙攣模型

(1)復(fù)制方法  雄性小鼠，體重為25～30g。

1)SAH的復(fù)制  經(jīng)腹腔注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉(60mg/kg體重)麻醉，手術(shù)區(qū)域皮膚消毒。切開分離右側(cè)股動脈并插管，以備抽取60μl自體血進(jìn)行顱內(nèi)注射用(在顱內(nèi)注射60μl的量時外漏少，且鼠死亡率低)。小鼠頭部前傾30°，頭頂后部正中切口，暴露頭骨。選用30號穿刺針從腦后下部中線向左向下45°穿刺進(jìn)入枕大池。由股動脈抽取60μl自體血(隨后腹腔注射60μl生理鹽水以補(bǔ)充正常體液量)緩慢注入枕大池，持續(xù)時間約1min。當(dāng)注入20μl時，動物呼吸出現(xiàn)異常，注入到60μl時，可能發(fā)生呼吸暫停。注射結(jié)束后立即使動物頭前傾75°，持續(xù)10min，以使血液在枕大池內(nèi)擴(kuò)散開來。緩慢抽出穿刺針，創(chuàng)面點滴2～3滴(按2.50×10000U/ kg體重的劑量)慶大霉素，結(jié)扎股動脈并抽出插管，仔細(xì)縫合切口以防腦脊液和血液外漏。手術(shù)期間保持動物體溫在37℃。動物于術(shù)后1h清醒并逐漸恢復(fù)正常攝食，正常術(shù)后死亡率<5％。

2)腦血管造影檢查  可分別于SAH后1, 6, 12h和1, 1.5, 2, 3, 4, 5和7d進(jìn)行腦血管造影：經(jīng)左心室插管，以5.5ml/min的速度灌注10％甲醛溶液2min，采用立體顯微攝像測量大腦前動脈、大腦中動脈和基底動脈。

3)組織學(xué)檢查  動物先以0.1mol/L的磷酸緩沖液灌洗，隨后以4％多聚甲醛和含有2.5％的谷氨酸鹽混合的0.1mol/L的磷酸緩沖液灌洗，速度為5.5ml/min。迅速摘除鼠腦并繼續(xù)固定在上述液體中(4℃)24h，分離大腦前動脈、大腦中動脈和基底動脈，做0.5μm厚度的切片，甲苯胺藍(lán)染色。

(2)模型特點  在SAH后2d內(nèi)大腦前動脈和基底動脈上方、大腦中動脈附近均有血凝塊，大腦前動脈周圍血凝塊多且清除緩慢，腦頂部血凝塊在SAH 3～4d后基本消失。大腦前動脈在SAH后1h開始收縮，其直徑可減少30％～40％，并持續(xù)1～3d，至第7日時，血管直徑逐漸恢復(fù)正常。大腦中動脈和基底動脈在SAH后6h收縮達(dá)20％～25％，并持續(xù)1～1.5d。病理組織學(xué)檢查可見，在SAH 1d后，血管壁的內(nèi)彈性層明顯皺縮、管腔狹窄、管壁增厚。血管的平滑肌細(xì)胞無明顯異常。準(zhǔn)確的操作可避免腦干、脊髓和小腦的損傷。

(3)比較醫(yī)學(xué)  截至目前，還沒有一個可以模仿人類DCV的動物模型。根據(jù)Schwartz的描述，良好的DCV模型應(yīng)具有：①持續(xù)性的蛛網(wǎng)膜下腔出血。②出血量可控。③出血機(jī)制酷似血管瘤的破裂。④血液的分布與蛛網(wǎng)膜下腔出血一致。⑤容易操作且價格合理。理想的實驗方法應(yīng)該是直接刺破血管壁，使血液流出。然而此種方法動物死亡率很高。此模型采用直接枕大池注血模擬了血管瘤破裂的方式，血液分布與SAH相似，并引起持續(xù)的血管痙攣，病理變化與人類DCV相似。而且具有重復(fù)性好、操作簡便、成本低、死亡率低的特點。