腦血栓形成動物模型

腦血栓形成動物模型

1 自體血血栓注入法(autologous blood emboli)

(1)復制方法  大鼠，體重為280～300g，雌雄不拘。準備一個PE-50導管(外徑0.3mm，內徑0.2mm)經(jīng)一軟管接微量加樣器，手術前充滿凝血酶(1×1000000U/L)。經(jīng)腹腔注射戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)或水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)麻醉后使動物仰臥位固定于手術臺上，剃除頸部毛發(fā)，手術區(qū)域消毒。取頸部正中切口，鈍性分離頸部肌肉，游離出雙側頸總動脈(OCA)、左側頸外動脈(ECA)。分離、結扎并離斷左側ECA分支，在頸動脈分叉遠端7～10mm處用5-0尼龍線將ECA結扎并離斷，留取遠端線頭下拉，使其與頸內動脈(ICA)接近一直線。分離左側 ICA，輕輕剝離迷走神經(jīng)，至鼓骨下緣可見ICA惟一顱外分支翼腭動脈，結扎該動脈，使ICA成為CCA顱外惟一保留動脈。用微動脈夾夾閉ICA及OCA，用尼龍線在ECA起始處打一松結，在ECA上距頸動脈分叉約3mm處剪一小口，從此小口將導管插入ECA管腔，并進入ICA，將ECA起始處的尼龍線扎緊以防導管移動及出血。移走ICA上的微動脈夾，繼續(xù)插入導管約10mm，此時，導管前端距MCA起始部2～3mm。抽取約10μl動脈血進入導管，停留約10min以形成栓子，暫時用微動脈夾夾閉對側CCA以降低腦血流，然后將導管中的栓子連同約10U凝血酶緩慢注入ICA。5min后移走右側CCA上的微動脈夾；10min后拔出導管，結扎ECA近端；15min后移走左側OCA上的微動脈夾，縫合皮膚。單籠飼養(yǎng)。還可參照腦卒中章節(jié)中局灶性腦缺血動物模型中的血栓法注入多個血栓栓子。

(2)檢測指標

1)行為障礙評分  于注射栓子后3、6、12h觀察動物行為障礙的程度并進行評分，將行為障礙分為5級：無行為障礙，0分；左側Homer征陽性，1分；右側前肢屈曲，2分；爬行時向右側劃大圈，3分；爬行時向右側劃小圈，4分。

2)大腦動脈環(huán)檢查  在手術后12h將存活動物斷頭，取出腦組織，在手術顯微鏡下觀察大腦動脈環(huán)及其分支有無栓塞表現(xiàn)。

3)腦梗死體積測定  將腦組織置于-22℃冰箱快速冷凍15min后，由前向后每隔2mm切取組織片7片，置2％紅四氮唑(TTC)溶液中37℃孵育30min，不顯色部分即為梗死組織。將組織片置入4％甲醛溶液中固定3～5h，在手術顯微鏡下將每片組織照相，經(jīng)圖像分析系統(tǒng)測量各層面面積、梗死面積、結合切片間距計算相應體積(mm3)，并計算梗死體積占對側大腦半球體積的百分比。

4)病理檢查  將腦組織置于4％甲醛溶液固定72h，常規(guī)石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察腦病理形態(tài)及MCA起始部栓子的構成。

(3)模型特點  動物在術后12h之內有死亡發(fā)生，死亡率為10％～15％。模型成功率約為總手術動物的60％。手術顯微鏡下觀察大腦動脈環(huán)可看到栓子位于MCA起始處，腦梗死體積面積占對側大腦半球體積的百分比的45％左右。光鏡下可見尾狀核、殼核、丘腦前部及外側部、海馬和額頂葉皮質表現(xiàn)為缺血性病變，神經(jīng)元腫脹、壞死，組織間隙水腫。大腦中動脈起始部栓子主要成分是纖維蛋白、血小板、白細胞和紅細胞。

(4)比較醫(yī)學  溶栓治療急性腦梗死的實驗動物模型與其他類型的腦梗死模型不同，要求腦梗死是由血栓栓子阻塞腦動脈所致。應用化學或物理方法損傷頸內動脈可形成血栓，但大鼠腦動脈側支循環(huán)豐富，僅栓塞頸內動脈很難形成的缺血灶。應用化學法直接刺激大鼠大腦中動脈形成的血栓模型需要開顱，破壞了顱內結構的完整性，影響了其實用價值。光化學方法誘導的血栓富含血小板而缺乏纖維蛋白，難以被溶栓藥物溶解，因而不宜用來做溶栓治療的實驗。該模型具有以下優(yōu)點：①直接插管至MCA起始部誘導血栓形成，梗死灶的大小和部位穩(wěn)定。②由凝血酶誘導血栓形成，更接近于臨床腦梗死的病理特點，血栓的組成成分與頸總動脈硬化斑塊相似。③對溶栓治療有良好的反應性。

手術失敗可分為三種情況：①出現(xiàn)蛛網(wǎng)膜下腔出血，占手術組的3％左右，由插管時損傷顱內動脈造成。②手術同側甚至對側大面積梗死，大鼠在12h內死亡，占10％左右，考慮可能是由于形成了多個栓子而造成多發(fā)性梗死。③未形成梗死灶或僅有小灶性梗死，占26.7％，可能的原因是凝血酶擴散，被血液稀釋，未能形成栓塞；或形成的栓子自溶，其碎片繼續(xù)隨血流移動，阻塞較小的動脈；或形成的栓子未到達位置，大腦中動脈仍可得到來自大腦前動脈的供血。

總體說來，此模型操作簡便，缺血效果可靠，梗死部位恒定，較接近人類腦血栓形成的臨床特點，適用于評價溶栓治療效果的實驗研究。

2 光化學法(photochemistry)

    參見局灶性腦缺血動物模型。