你真以為做ceRNA就這么簡單么？

大家一直都覺得ceRNA的研究，就是研究LncRNA的簡便機制了是吧。因為都不用來論證啥，就直接證明LncRNA和對應的mRNA能同時結合miRNA就行了，不是么？

其實，也不全是，當然，要是把ceRNA作為低分的LncRNA研究機制的話，那簡單的就是做一個Luciferase實驗：

也就是利用Luciferase的3'UTR結合miRNA，來驗證一下lncRNA和mRNA是不是分別能和miRNA結合。這個都是研究miRNA的基本套路。

但LncRNA并不會表達蛋白，所以用Luciferase的方法，并不靠譜。所以就需要通過別的實驗來驗證。

用于ceRNA研究的常用的方法還有MS2-RIP,就是體外過表達LncRNA的時候，在末端接上一個MS2蛋白結合的串聯序列，然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀（RIP）的方法拉下來。當然LncRNA上會帶有結合的miRNA，把拉下來的miRNA做real-time PCR就可以了。

當然，類似的方法，還有用生物素標記LncRNA的RIP，同樣也是將LncRNA拉下來，然后再通過Real-time PCR來看結合上去的miRNA的表達。

其實這兩種方法，都有異曲同工的作用，就是驗證LncRNA與miRNA的結合。但是這兩種方法，其實也不能解釋mRNA是否能與LncRNA形成ceRNA的關系。于是就產生了這樣的方法：

由于miRNA形成RISC復合體結合的時候，是被AGO蛋白包裹的，主要是AGO2。也就是說，拉下AGO2蛋白，就能拉下結合在上面的miRNA，這樣RISC結合的LncRNA以及mRNA也會被拉下來。這就是AGO2-RIP，也就是通過拉miRNA，來分析miRNA結合的LncRNA以及mRNA的量：

用這種方法，可以相對直接地研究ceRNA之間的關系。當然，在較高分的ceRNA的研究中，這種方法也是被經常用到的。