ELISA免疫測定，實驗技巧！！

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。在臨床檢驗中主要通過抗原抗體反應檢測體液中的抗體或抗原性物質。

ELISA免疫測定目的是？

1.測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等；

2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等；

3.測定抗生素和藥物；

4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；

5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等；

ELISA免疫測定原理

①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶標 抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成比例；再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

ELISA免疫測定步驟

1.　包被；

2.　加樣：加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)；

3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml；

6.　結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。

ELISA免疫測定流程圖

ELISA免疫測定流程圖