結(jié)締組織類細胞培養(yǎng)

一、成纖維細胞培養(yǎng)

用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)；如為人胚，可取皮膚培養(yǎng)。幼兒包皮是培養(yǎng)成纖維細胞的很好對象。

二、巨噬細胞培養(yǎng)

1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內(nèi)）。

2．引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70％酒精中3～5秒。

3．置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。

4．再用70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同時從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動。

5．用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。

6．小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g 4℃離心10分鐘，去上清，加10 ml Eagle培養(yǎng)基。

7．計數(shù)細胞，每只小鼠可產(chǎn)生20～30×105細胞，其中90％為巨噬細胞。

8．為獲取3×105個帖附細胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。

9．為純化培養(yǎng)細胞，去除其它白細胞，在細胞培養(yǎng)接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃ CO2溫箱中培養(yǎng)。